PCR扩增过程中会产生DNA/RNA气溶胶污染的问题。极其微量的气溶胶污染即可造成假阳性的结果,进而可能引起整个PCR实验室的污染,严重的甚至要关闭实验室。目前治理气溶胶污染的常规方法有:酒精擦拭、紫外线照射、高压变性。这三种方法都存在不同程度的缺陷。若PCR实验室遇到DNA/RNA气溶胶污染,建议您采取以下措施防治:
1、设置阴性对照:必须设置一个不含模板DNA但含有PCR系统中所有其他成分的对照反应(阴参/空白对照),时刻注意污染的监测,判断有无污染,是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。
2、实验室分区:PCR实验室按 《医疗机构临床扩增实验室管理办法》 (卫办医政发〔2010〕194号)规定进行分区,工作和空气流向都严格按照试剂准备区→标本制备区→PCR扩增区→产物分析区。
3、提高规范操作意识:定期组织全员进行防污染安全培训,宣讲PCR实验室操作规范,印发并讲解《医疗机构临床扩增实验室管理办法》(卫办医政发〔2010〕194号)、《关于做好血站核酸检测工作的通知》(国卫办医发〔2015〕11号)、《血站核酸检测实验室质量保证指南》、 《法庭科学DNA实验室规范》(GA/T382-2002)、《法庭科学DNA实验室检验规范》(GA/T383-2002)等文件。
4、常规操作清洁:在样本处理前后,使用朗司LemnisCare的PCR_Cleaner(核酸气溶胶污染清除剂),清洁设备、耗材、操作台。经深圳市朗司医疗科技有限公司实验证明,可有效降解95%以上的DNA气溶胶污染、99%以上的RNA气溶胶污染。
5、重点清洁:安排保洁员使用朗司LemnisCare的PCR_Cleaner对重点区域、核酸提取仪、PCR仪、离心机等进行清洁操作,确保气溶胶污染没有累积。
6、月度清洁:LemnisCare推荐您有计划进行月度大清理,使用PCR_Cleaner对超净工作台,实验桌,地面以及门、玻璃、实验服、记号笔等进行大面积清除DNA/RNA气溶胶污染物。
7、紫外照射:LemnisCare推荐您每天工作完毕,开紫外灯照射工作区30分钟,用全自动核酸提取仪提取核酸后,应将紫外线照射延长到8小时。
特别注意:
①对污染的监控很重要:安排质控员记录阳性率及假阳性的发生频率,及时发现异常;同时采集环境中的样本进行核酸污染分析(深圳市朗司医疗科技有限公司可提供污染溯源技术指导,提供必要的技术手段,尽早发现污染源,尽快清除污染)。
②有效的应急处理很关键:若您所在的PCR实验室发生以下情况(阳性率异常升高,空白对照/阴参频繁出现假阳性,发现未知扩增条带重复出现),极有可能发生了核酸气溶胶的突发性污染,可以使用朗司LemnisCare的PCR_Cleaner进行紧急污染源的排除和清理。